成果報告書詳細
管理番号20110000001158
タイトル*平成22年度中間年報 基礎研究から臨床研究への橋渡し促進技術開発/橋渡し促進技術開発/アルツハイマー病の根本治療を目指した新規治療法の研究開発(三菱化学メディエンス株式会社担当分)
公開日2011/11/23
報告書年度2010 - 2010
委託先名三菱化学メディエンス株式会社
プロジェクト番号P07022
部署名バイオテクノロジー・医療技術部
和文要約和文要約等以下本編抜粋:1. 研究開発の内容及び成果等 I-2: 老齢サルを用いた抗体投与の有効性と安全性の検証 (自治医科大学・霊長類医科学研究センター・京都大学医学部附属病院探索医療センター/分子細胞治療センター・三菱化学メディエンス、共同実施先:日本べーリンガーインゲルハイム) 本研究の遂行のためには、抗体投与老齢サルの髄液や血液中の抗体量のモニターが必須となる。平成22年度、三菱化学メディエンスではASPD抗体測定系開発の基礎検討を行った。
【検体中測定条件の設定】 ASPD抗体濃度測定ELISAを構築するのに必用となるASPD固相化プレートの調製の条件検討を行った。
(1) 150mM 食塩を含む10mMリン酸緩衝液pH7.4(PBS)で希釈調製したASPD(1μg/mL)100μL をELISA プレートのウェルに分注し、4℃一晩静置により固相化した。0.1%Tween20を含むPBSで3回洗浄した後、ブロック剤処理の有無とコーティング剤の種類を検討した。
(2) ブロックエースによるブロック剤処理の有無、スタビルコートとマニトールコーティングによる乾燥状態での保存性確認を行った。
(3) ブロックエース処理プレートは抗ASPDマウスモノクローナル抗体では特異的反応性を示したが、正常ヒト血漿で非特異的結合性を示したため不採用とした。スタビルコートとマニトールコートでは乾燥直後の反応性に差がなかったため、実績のあるスタビルコートを採用した。
(4) このプレートと酵素標識抗マウスイムノグロブリンを用い、マウスASPD抗体を定量することが出来た。このASPD固相化プレートは安定であり、半年後の測定でも同様の反応性を示した。
この試薬は抗体投与後の有効性と安全性の検証には必須である。
英文要約Research aiming the development of new rational therapies for Alzheimer's disease
Currently, Alzheimer's disease (AD) causes about 60 % of dementia, which affects two million people in our country and thirty million more in worldwide, yet there exists no effective treatment so far. One of the problems with conventional treatment strategies is, although the patients’ brains contain various assemblies derived from amyloid β-protein (Aβ), that Aβ treatments to remove Aβ have been developed without clarifying which type of Aβ assemblies indeed serves as a toxin that causes neurodegeneration in AD brains. Unfortunately, results of most clinical trials of these therapies showed safety issues. In this situation, we consider that new treatments need to be developed based on a better understanding of the causative agent. We therefore isolated the toxic agents from the brains of AD patients, which we termed amylospheroids (ASPDs) (Noguchi et al. JBC 2009). ASPDs appear to acquire their strong neurotoxicity by forming unique toxic surfaces specific to them. We have succeeded to develop anti-ASPD antibodies that recognize the ASPD-specific tertiary structures and can neutralize the ASPD neurotoxicity. Here, we aim to develop an immunotherapy that targets the causative agent using an anti-ASPD antibody developed in our group. Since we have both antibody and antigen at hand, we also aim to develop an active immunotherapy using ASPDs themselves. Such therapies cannot be developed without identifying the neurotoxic assemblies that indeed exist in AD patient brains.
Mitsubishi Chemical Medience Corporation (MCM) contribute to following two points of this project;
(1) As for a passive immunotherapy using an anti-ASPD antibody, we will validate the concept using aged monkeys. After confirming effectiveness and safety of the antibody, we will start the exploratory clinical study with the approval of the Ethics Committee.
 MCM prepare the assay system for determination of ASPD and ASPD antibody concentration that need to confirm the effectiveness and safety of the antibody.
(2) As for an active immunotherapy using ASPDs, we will examine the effectiveness of vaccines using aged monkeys by monitoring PET changes as well as the cerebrospinal fluid AD markers.
MCM analyze the ASPD and ASPD antibody in the cerebrospinal fluid or cultured cell with no interference of other substances.
 This year, we developed ASPD immobilized ELISA plate for determination of anti-ASPD antibody concentration, and contributed the study that medical treatment of ASPD antibody consequently. The ASPD in brain of Alzheimer's disease patients were determined by constructed ASPD measurement ELISA, that demonstrated in vivo ASPD was recognized by antibody for ASPD prepared in vitro. Moreover, study of alkaline phosphatase labeling techniques was accomplished for improvement the ASPD detection sensitivity
 As noted above, our project has proceeded smoothly as planned this year.
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