成果報告書詳細
管理番号20110000001501
タイトル平成18年度~平成22年度成果報告書 新機能抗体創製技術開発/高効率な抗体分離精製技術の開発
公開日2011/11/23
報告書年度2006 - 2010
委託先名独立行政法人産業技術総合研究所
プロジェクト番号P06009
部署名バイオテクノロジー・医療技術部
和文要約件名:平成18年度~平成22年度成果報告書 新機能抗体創製技術開発/高効率な抗体分離精製技術の開発

抗体結合性を有する新規タンパク質の設計・創製技術の開発、多品種の抗体分子に対応可能で、結合・解離特性の優れたタンパク質分子リガンドを迅速・安価に提供するための設計技術、合成技術、評価技術の観点から研究開発を行った。その結果、低コストで且つ効率の良い配向制御固定化を可能にするアフィニティリガンドの基本配列様式を開発し、これをプラットフォームとし、各種抗体に対応できる骨格配列を収集することにより、一次ライブラ二次ライブラリーを作製した。多数のリガンドIgG結合特性を同時に評価できる固定化リガンドのハイスループット分析装置と、多数の溶媒に対する特定のリガンドからのIgG溶出パターンを順次測定できる装置を開発した。商業スケールでモノクローナル抗体を高効率に精製するため、化学的安定性を有するシリカ担体を開発し、cGMP準拠の製法を確立した。リガンド評価装置用として、ガラス板上薄層モノリスシリカゲル、およびミクロサイズモノリスカラムを開発し、品質の安定した製造技術を確立した。IgG様抗体を生産する3 種類のCHO細胞ラインを構築し、無血清培地で順養した。また、動力学的パラメータと抗体多様性を、構築したレクチン結合アッセイを使用して小規模フェドバッチ培養で評価した。24種類のヒトもしくはヒト型化モノクローナル抗体を精製技術検証用パイプラインとして用いそれを発現するCHO細胞培養液から精製を行い、精製抗体の品質と機能を評価することで開発した精製技術の検証を行い、技術の有用性を確認した。
英文要約Title: Development of New Functional Antibody Technologies/Development of High Performance Separation Technologies for Antibodies (FY2006-FY2010) Final Report

Versatile IgG binding proteins with strong-affinity at binding conditions and effective dissociation profile at mild elution conditions, applicable as an affinity ligand wide range of molecular species of monoclonal antibodies was developed from the points of protein design technologies, protein libraries, low cost productions, and evaluation technologies. We also developed a novel platform for affinity ligand with enabling orient-controlled immobilization with high efficiency and low costs.For the effective industrial-scale purification of monoclonal antibodies, silica-based media with high chemical stability was developed and manufactured according to cGMP standard. Thin layer monolith silica gel on the glass plate and micro size monolith column were developed and established the manufacturing procedure for ligand evaluation instrument. Serum-free adapted 3 Chinese hamster ovary (CHO) cell lines producing IgG-like model antibodies and standardized preparation protocol using these cell lines were established. The antibody varieties were evaluated in small-scale cell culture using constructed high-sensitive assay. To evaluate the developed purification technology, 24 monoclonal antibodies were chosen as production pipelines and 19 antibodies of them were highly purified with good quality and efficiency. Thus, the availability of the technologies developed in this project was valuated.
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