成果報告書詳細
管理番号20140000000790
タイトル平成23年度-平成24年度成果報告書 SBIR技術革新事業 「高感度エンドトキシン測定ESP法の迅速検出法に関する研究開発」
公開日2014/12/6
報告書年度2011 - 2012
委託先名株式会社プロジェクトKBF
プロジェクト番号P08015
部署名イノベーション推進部
和文要約件名:平成23年度-平成24年度成果報告書 SBIR技術革新事業 「高感度エンドトキシン測定ESP法の迅速検出法に関する研究開発」

従来のエンドトキシン測定法である比濁時間法は、カブトガニ血球抽出液(リムルス試薬)がエンドトキシン特異的にゲル化する過程を濁度でもって定量化し、測定法が作られた。結果の出せないその方法に根本的な疑問を持ち、撹拌という従来法では考えなかった条件下、均一な反応条件で発生するゲル化過程の小粒子を、レーザー散乱によって捉え、その発生時期を以て高感度かつ迅速な測定法として開発されたのがレーザー散乱測光法(ESP法)である。ESP法自体では、携帯装置作成も、30分以内10EU/L検出も既に満たしている。実際に要求される極低濃度透析液検出には1時間前後掛かるため、今回のプロジェクトでは、粒子発生以前の段階で、定量的におきるリムルス試薬の反応を溶液粘度の変化で捉えるというアイデアによって、30分以内という課題の達成を目指した。その結果、20分反応、標準エンドトキシンでは0.04-480EU/Lまで検量線が描けることを証明した。透析液の測定を、同一試料でESP法と粘度法による比較を行った。ESP法による測定時間と粘度による観測値の相関を取ったが、r=0.51(n=24)であった。ただ透析液試料では、濃度範囲が0.1EU/L以下のものが主であり、測定誤差についてもう少し数の測定が必要ある。携帯型開発への壁となっている粘度装置の小型化については、パソコン等で利用される小型駆動装置を使った低粘度測定仕様の装置の可能性をメーカーと検討した。
英文要約Title: Technology Innovation Program for Small Business Innovation Research / The study of early detection in high sensitive endotoxin assay, Endotoxin Scattering Photometry method. (FY2011-FY2012) Final Report

To elucidate for getting accurate endotoxin concentration in medical samples,we have found and established highly sensitive endotoxin assay system, Endotoxin Scattering Photometry (ESP) method with observing Laser scattering in LAL reaction with endotoxin. (JPN Pat.#4551980, 2010.03) This new method can detect 0.001pg/mL (0.0048mEU/mL) within 110 min. The principle of ESP method is based on detecting LAL gel particle under agitating condition with endotoxin by Laser Scattering. The assay system also based on detecting the timing of appearance of gel particle with ESP condition, and the appearance of timing depends on the concentration of endotoxin. On the contrary,ordinary endotoxin assay, Turbidmetric assay, has detected gelation process with gel turbidity after finishing ESP assay observation. In medical usage for assaying endotoxin, it should be faster the better. We have examined the possibility to detect earlier event before gelation. This idea was estimated by the observation of ESP method principle. We have found the physical change during this latent gel phase using viscosity measurement. This new method has shown fine calibrated LAL reaction from 480 to 0.048 mEU/mL within 20 min.We have studied Viscosity measurement in dialysed fluid in hemo-dialysed treatment. The same sample are assayed with Laser-Scattering method to compare Viscosity measurement. The result showed moderate correlation (r=0.51, n=24) between Viscosity measurement and Laser Scattering method. There are many problems to assay this short term measurement experiment with viscosity. From the view point of ESP principle, there would be many problem to assay only viscosity within 20 min, we also has planned to follow these problem up to solve and support determination accurately by hybridizing ESP systems and viscosity measurement system. We have estimated the possibility to hybridize two systems setting in compact compartment for carrying in medical field directly.
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