成果報告書詳細
管理番号20100000000081
タイトル平成20年度成果報告書 平成20年度第1回採択産業技術研究助成事業 08A01017a DNA伸長合成反応のリアルタイム1分子検出による高速DNA1分子シーケンス技術の開発研究 平成20年度中間
公開日2010/2/18
報告書年度2008 - 2008
委託先名独立行政法人産業技術総合研究所平野研
プロジェクト番号P00041
部署名研究開発推進部 若手研究グラントグループ
和文要約今年度(第1年目)は、当初の計画通り、DNA1分子シーケンスの達成に必要不可欠である、蛍光色素1分子を高感度、高コントラストに検出するための全反射顕微鏡の開発とDNAポリメラーゼの探索・改変・機能解析を行った。蛍光色素1分子を高感度、高コントラストに検出するための全反射顕微鏡の改良・構築では、高感度・高ダイナミックレンジEM-CCDカメラと近赤外レーザー励起の導入による検出光学系の再設計等の改良により、蛍光色素1分子の高感度・高コントラストの検出に成功することができた。また、DNAポリメラーゼの探索・改変・機能解析では、蛍光標識されたdNTP(以下、蛍光dNTP)に対するDNAポリメラーゼの忠実度解析、蛍光dNTPを連続的に取り込む新規DNAポリメラーゼ分子種の探索(4種類)、DNAポリメラーゼ改変体の作製と機能解析、近赤外レーザー励起に最適な蛍光dNTPの探索を行い、最適なポリメラーゼの確認と蛍光色素の選定を達成することができた。併せて、DNAポリメラーゼの機能解析を高速化するために、シーケンスゲル電気泳動を高速化する電気泳動バッファーの開発を行い、高速化を実現した。
英文要約To achieve our purpose, we evaluated and developed twofold. Fist, we achieved to construct new multi-color TIRFM (total internal reflection fluorescence microscope) equipped with high-sensitive CCD camera and near RI laser excitation system. This new developed multi-color TIRFM is able to detect single molecule of fluorophores with high-sensitivity and high-contrast. Second, we evaluate DNA polymerase which is able to incorporate florophore-labeled dNTP consecutively. Especially, DNA polymerases are analyzed their fidelity and incorporation properties on fluorophore-labeled dNTP. We found best DNA polymerase and dNTP for single DNA molecule sequencing.
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